Книга: Биссвангер Х. «Практическая энзимология»

Серия: "Методы в биологии"

В учебном издании, написанном известным ученым из Германии, рассмотрены теоретические основы методов энзимологии, а также приведены описания основополагающих лабораторных работ.
Для студентов-химиков, биохимиков и биологов, специалистов, работающих в исследовательских и промышленных лабораториях, а также для медиков — научных работников.

Содержание:

Предисловие к русскому изданию...... 10 Предисловие...... 12 Сокращения...... 14 1. Введение...... 16 2. Номенклатура ферментов...... 19 3. Ферментативные реакции...... 22 3. 1 Теория ферментативной реакции...... 22 3. 1. 1 Порядок реакции...... 22 3. 2 Уравнение Михаэлиса–Ментен...... 25 3. 3 Теория ферментативного анализа...... 33 3. 3. 1 Анализ кинетической кривой...... 33 3. 3. 2 Проведение ферментативного анализа...... 39 3. 3. 3 Активность фермента...... 49 3. 4 Теория сопряженных ферментативных реакций...... 55 3. 4. 1 Две сопряженные реакции...... 55 3. 4. 2 Три сопряженные реакции...... 59 3. 5 Определение концентрации субстрата...... 59 3. 5. 1 Метод конечной точки...... 59 3. 5. 2 Сопряженные ферментативные реакции...... 62 3. 5. 3 Кинетический метод определения концентрации субстрата...... 62 3. 5. 4 Циклические ферментативные процессы...... 63 3. 6 Методы ферментативного анализа...... 65 3. 6. 1 Спектральные методы...... 66 3. 6. 2 Электрохимические методы...... 82 3. 6. 3 Реакции, протекающие с выделением или поглощением газа...... 85 3. 7 Ферментативный анализ...... 87 3. 7. 1 Общие замечания...... 87 3. 7. 2 Практические аспекты...... 91 3. 7. 3 Буферы и растворы...... 92 3. 7. 4 Определение оксидоредуктаз...... 99 3. 7. 5 Пируватдегидрогеназный комплекс (ПДГК)...... 120 3. 7. 6 &# 945;-Оксоглутаратдегидрогеназный комплекс (ОГДГК)...... 130 3. 7. 7 Трансферазы...... 132 3. 7. 8 Гидролазы...... 139 3. 7. 9 Протеазы...... 154 3. 7. 10 Лиазы...... 167 3. 7. 11 Изомеразы...... 171 3. 7. 12 Определение концентрации никотинамидных нуклеотидов с помощью сопряженных ферментативных реакций...... 175 3. 8 Различные методы...... 179 3. 8. 1 Определение концентрации белков...... 179 3. 8. 2 Определение концентрации фосфата...... 194 3. 8. 3 Концентрирование растворов ферментов...... 195 3. 9 Иммуноферментный анализ...... 203 3. 9. 1 Неконкурентный твердофазный иммуноферментный анализ...... 204 3. 9. 2 Конкурентный твердофазный иммуноферментный анализ...... 205 3. 9. 3 Методы иммуноферментного анализа и способы иммобилизации...... 206 4. Изучение связывания...... 213 4. 1 Необратимое, обратимое, специфическое и неспецифическое связывание...... 213 4. 1. 1 Общие замечания...... 213 4. 1. 2 Экспериментальные аспекты...... 216 4. 2 Анализ связывания с помощью определения размеров частиц...... 219 4. 2. 1 Ультрафильтрация...... 220 4. 2. 2 Равновесный диализ...... 221 4. 2. 3 Обработка результатов эксперимента по изучению связывания...... 227 4. 2. 4 Гель-фильтрация...... 230 4. 2. 5 Ультрацентрифугирование...... 232 4. 3 Спектральные методы...... 234 4. 3. 1 Дифференциальная спектроскопия...... 235 4. 3. 2 Флуоресцентная спектроскопия...... 247 4. 4 Другие методы анализа связывания...... 255 4. 4. 1 Радиоактивная метка...... 255 4. 4. 2 Отражательная интерференционная спектроскопия...... 256 5. Применение ферментов в технологических процессах...... 257 5. 1 Принципы иммобилизации ферментов...... 258 5. 1. 1 Адсорбция...... 259 5. 1. 2 Включение в пористую матрицу...... 260 5. 1. 3 Капсулирование...... 261 5. 1. 4 Образование перекрестных сшивок...... 262 5. 1. 5 Ковалентное связывание на твердом носителе...... 264 5. 2 Методы иммобилизации ферментов...... 266 5. 2. 1 Микрокапсулирование в нейлоновые шарики...... 267 5. 2. 2 Включение в полиакриламидный гель...... 267 5. 2. 3 Ковалентная иммобилизация фермента на поверхности непористого стекла...... 269 5. 2. 4 Иммобилизация на стекле с контролируемым размером пор...... 272 5. 2. 5 Ковалентная иммобилизация на полиамидной матрице...... 274 5. 2. 6 О-Алкилирование с помощью тетрафторбората триэтилоксония...... 275 5. 2. 7 Связывание фермента с аминогруппами после частичного гидролиза полиамида...... 278 5. 2. 8 Связывание фермента с карбоксильными группами после частичного гидролиза полиамида...... 281 5. 2. 9 Иммобилизация фермента на полиэфирной матрице...... 281 5. 2. 10 Иммобилизация с помощью щелочного гидролиза и активации тозилхлоридом...... 284 5. 2. 11 Щелочной гидролиз и активация карбонилдиимидазолом...... 285 5. 3 Методы анализа иммобилизованных ферментов...... 286 5. 3. 1 Определение концентрации белка...... 286 5. 3. 2 Определение ферментативной активности...... 287 5. 4 Биореакторы...... 290 5. 4. 1 Реактор периодического действия...... 292 5. 4. 2 Мембранный реактор...... 292 5. 4. 3 Реактор с неподвижным слоем...... 293 5. 4. 4 Иммобилизованные клетки...... 294 5. 5 Биосенсоры...... 294 5. 5. 1 Ферментные электроды...... 294 5. 5. 2 Иммунные сенсоры...... 300 5. 5. 3 Другие типы биосенсоров...... 301 5. 5. 4 Биоаффинные сенсоры...... 302 5. 6 Иммобилизованные ферменты в медицине...... 302 Приложение...... 304 Список ферментов в соответствии с их международной классификацией (КФ)...... 304 Предметный указатель...... 322

Издательство: "БИНОМ. Лаборатория знаний" (2014)

ISBN: 9785996324026